„Програма за дијагноза и третман на нова коронарна вирусна пневмонија (Пробно деветто издание)“ користи вредност на Ct за откривање на нуклеинска киселина ≥35 како една од важните основи за ослободување од управувањето со изолацијата или испуштањето.Значи, што претставува вредноста на Ct на комплетот за детекција на нуклеинска киселина?Дали се споредливи вредностите на Ct на различни комплети?Дали колку е помала вредноста на Ct, толку се подобри перформансите на комплетот?
Ct вредност (Threshold Cycle, Ct) е бројот на PCR циклуси кога интензитетот на квантитативниот флуоресцентен сигнал за флуоресценција во реално време го надминува зададениот праг.Комплетите за детекција на нуклеинска киселина ја земаат како пример новата круна.За иста реакција на истиот комплет за откривање на два примероци што содржат вирус, A и B, големината на вредноста на Ct претставува, до одреден степен, бројот на копии на вирусниот ген, односно вирусното оптоварување.Колку е помал Ct на примерокот B, толку е поголемо вирусното оптоварување.Вредноста на Ct е обратно пропорционална на вирусното оптоварување и неговата инфективност.Добрите и лошите страни на различните квантитативни комплети за флуоресценција во реално време не може да се проценат само според големината на вредноста на Ct, бидејќи вредностите на Ct на различни комплети не се споредливи.Евалуацијата на перформансите на комплетот треба да се мери од аспекти на чувствителност (минимална граница за откривање), специфичност, прецизност, стабилност и дијагностичка примена.Секој производител на реагенси има свои осумнаесет видови на боречки вештини и тие имаат свои магични моќи во примена, па затоа нема да навлегувам во детали овде.
За конвенционалните инструменти/системи за анализа на квантитативна PCR (QPCR) во реално време, стекнувањето на вредностите на Ct и нивната широка употреба во апликациите за откривање патогени се познати на сите.Со развојот на индустријата и напредокот на технологијата, QPCR опремата и реагенсите се соочија со можности и предизвици.Yiou Think Tank (Истражувачки извештај за 2021 година за кинеската индустрија за генетско тестирање: технологија) анализираше дека повеќето компании во QPCR индустријата во мојата земја се соочуваат со заеднички проблеми засновани на технологија.Како одговор на овие проблеми, решенијата главно се поделени на два вида: забрзување на подобрувањето на технологијата и примена на нови технологии.
POCT за молекуларна дијагноза QPCR е една од развојните насоки на индустријата, а подобрувањето на перформансите е важен фактор за забрзување на примената на технологијата.Како да се оптимизира вредноста на Ct на клучниот параметар на една реакција во R&D за POCT опрема со пропусната моќ на еден примерок на QPCR?Истата опрема, истиот систем на реакција и истата концентрација на шаблонот, теоретски колку е поголема вредноста на Ct на една реакција, толку е помала ефикасноста на ензимот во реакцијата.
Во процесот на подобрување на ефикасноста на ензимската реакција и оптимизирање на вредноста на Ct, најпрво може да се анализира типична крива на квантитативно засилување со флуоресценција од 40 PCR циклус.Кривата на засилување на сликата подолу е поделена на фаза на флуоресцентна позадина, фаза на експоненцијално засилување, линеарна фаза и фаза на плато.За да се постигне пониска флуоресцентна позадина, колку што е можно да се разликува од вредноста на флуоресценцијата на раното експоненцијално засилување, неопходно е да се тестира од носачот на потрошен материјал за реакција, скрининг на дизајн на сондата за прајмер и систем за реакционен тампон.Периодот на експоненцијално засилување е најдиректната реакција на ензимската активност, а исто така е доказ за совршената координација на POCT опремата, носителите на реакција и реагенсите.Во овој момент, контролата на температурата на опремата, стекнувањето и анализата на оптички сигнал, биокомпатибилноста на носителот и перформансите на системот на реагенсите треба да се прилагодат и тестираат во сите аспекти.Конечно, целото засилување е завршено, а резултатите мора да бидат претставени со ригорозен податочен алгоритам за да се добие разумна вредност на Ct.
Мал чекор во оптимизацијата на вредноста на Ct се безбројните чекори на персоналот за истражување и развој.Во вознемиреноста и возбудата на денот и ноќта, секогаш кога „планините и реките ги нема никаде, врбите се темни, а цвеќињата светли и има друго село“, што ни дава храброст и страст да одиме напред. повторно.
Време на објавување: 29-ти септември 2022 година